annotate pangenomeCogAnalysis_V1.pl @ 2:0428ce25da81 draft

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#!/usr/bin/perl

use strict;
use warnings;

my $num_args = $#ARGV + 1;
if ($num_args != 10) {
    print "Il n'y a pas le bon nombre d'arguments !\n";
    exit;
}

# INPUT_
my $matrix_file = $ARGV[0]; # fichier tabulé : une liste d'orthogroupes qui se retrouvent ou non dans les différentes souches
my $species_file = $ARGV[1]; # association de chaque souche à son espèce (fichier tabulé également)
my $annotation = $ARGV[2]; # collection de fichiers tabulés qui contiennent pour chaque gène la ou les catégories de COG associée(s)
my $order = $ARGV[3]; # cette entrée correspond simplement au nom des souches qui sont rentrées dans le même ordre que les fichiers d'annotation : cela permet de savoir pour un fichier COG à quelle souche et donc plus tard à quelle espèce il correspond
my $annotation_GFF = $ARGV[4]; # fichiers avec les GFF
my $order_GFF = $ARGV[5];

# OUTPUT_
my $output = $ARGV[6]; # liste des espèces avec leurs orthogroupes (présence-absence)
my $output2 = $ARGV[7]; # fichier des moyennes
my $output3 = $ARGV[8]; # fichier de la liste des valeurs pour chaque catégorie de COG et pour chaque espèce 
my $output4 = $ARGV[9]; # fichier avec les catégories de COG pour core-génome / génome accessoire / gènes spé


# print "ok\n";
# exit;

my @list_gff = split(',', $annotation_GFF); # liste des différents fichiers GFF (qui se retrouvent dans le dossier Annotation Maker)
my %hSpecies = (); # HASH -> key: N_Id (ex NF_AR12) ; val: nom de l'esp (ex Naegleria Fowleri) 

######################## LE SPECIES_FILE ###########################
open (S, $species_file);
while (my $line = <S>){

    $line =~s/\n//g;  $line =~s/\r//g;  
    my @sp = split('\t', $line);
    # print "$line\n"; 
    # exit; 
    $hSpecies{$sp[0]} = $sp[1]; # HASH -> key: N_Id ; val: name

}
 my $nbr = keys (%hSpecies); #compter le nombre de souches max 
                             # = taille de la table de hash  
# print "J'ai $nbr clés\n";
# exit;

close (S);

#///////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////

############################################ LA MATRICE ############################################

open(M, $matrix_file);

my $first_line = <M>;
$first_line =~s/\n//g;  $first_line =~s/\r//g; # ne garder que la première ligne du tableau 
my @samples = split(/\t/,$first_line); # mettre dans une liste (@samples) chaque intitulé de colonne = N_Id
# print "$first_line\n";
# exit; 

# Le but ici est de récupérer les combinaisons associées à chaque espèce : NF, NG et NL 
my %hCombination =(); # HASH -> key: N_Id ; val: combinaison

for (my $i=1; $i <= $#samples; $i++){ # on parcourt chaque colonne ($i) mais on ne regarde que le N_Id
    my $header = $samples[$i]; # on récupère le N_Id dans $header (soit le nom de la colonne i)
    my $species = $hSpecies{$header}; # on regarde dans la table avec N_Id => Nom esp et on attribue à chaque header (qui est ici une clé) sa valeur donc son nom d'esp correspondant 
    $hCombination{$species} .= "_".$i; # à chaque tour de boucle, pour une $species spé va ajouter le n° de colonne $i pour avoir la combinaison spé à chaque esp
    # print "$header\n";
    # exit;   
}  


# foreach my $species (keys (%hCombination)){
#     my $combination = $hCombination{$species};
#     # print "$species $combination\n";
# } 


# exit;

# orthogrp présents :
my %hCombination_prs = (); # HASH -> key: combinaison ; val: liste des orthogroupes
# orthogrp absents :
my %hCombination_abs = (); # idem



my %coregenes = (); # HASH -> key: gene ; val: orthogroupe (pour core-genome)
my %specificgenes = (); # HASH -> key: gene ; val: orthogroupe (pour gènes spécifiques)
my %accessorygenes = (); # HASH -> key: gene ; val: orthogroupe (pour génome accessoire)

my $coregene_line; 
my %coregenes2 = (); # HASH -> key1: colonne i ; key2: gène ; val: orthogroupe

my %Genes_of_OG = (); # HASH -> key1: orthogroupe ; key2: colonne i ; val: gène


while(<M>) {

    my $line = $_;
    $line =~s/\n//g; $line =~s/\r//g;
    my $nb_found = 0;
	my @infos = split(/\t/,$line);
	my $orthogroup = $infos[0]; # on récupère le nom de l'orthogroupe dans $orthogroup
    my $first_column = $infos[1]; # ici on récupère les gènes de la première colonne qui vont nous servir pour le core-génome
    my $combi_prs = "";
    my $combi_abs = "";
    my $val;
	my $gene_random;


    for (my $i=1; $i <= $#infos; $i++){ # on travaille par ligne puis dans chaque ligne (while(<M>)), cellule par cellule (cette boucle for)

        $val = $infos[$i]; # on récupère l'information contenue dans la case $i

		if ($val =~/\w/){  # s'il cette cellule contient qq chose...
            $combi_prs .= "_".$i; # ...on va concaténer notre chaine $combi_prs pour que cela forme une combinaison    
            $nb_found++; # on incrémente le compteur qui permet de savoir cb de fois notre orthogroupe est présent (le but sera de l'utiliser quand nb_found == 9)
            $gene_random=$val; # on récupère la valeur de la case (les gènes)

            my @table_genes = split (',', $val);
            my $premier_gene = $table_genes[0];
            $Genes_of_OG{$i}{$orthogroup} = $premier_gene; # pour chaque orthorgoupe de chaque colonne, on récupère le premier gène
        }

        else { # si jamais il n'y a rien dans la cellule...
            $combi_abs .= "_".$i; # ... on fait la même chose mais avec $combi_abs
        }
        
    }
   
        # $hCount{$combi}++;
    $hCombination_prs{$combi_prs}.=$orthogroup."\n";  # à la fin de chaque ligne, on va ajouter notre orthogroupe à la combinaison qui lui correspond
    $hCombination_abs{$combi_abs}.=$orthogroup."\n";
    
    

    if ($nb_found == $#infos){ # si nb_found = au nombre de souche, c'est qu'on a à faire à un core-génome
        # print "$orthogroup\n";	
        # print "$nb_found\n=================\n";
        for (my $i=1; $i <= $#infos; $i++){
            my @list_of_genes = split (',', $infos[$i]); # ici va séparer tous les gènes (qui se présentent comme une liste, séparés par des ',')
            my $first_gene = $list_of_genes[0]; # prend la valeur du premier gène uniquement !
            $coregenes{$first_gene}= $orthogroup; # on va récupérer ce premier gène qu'on met dans un hash (pour y avoir accès facilement, d'où val = 1, ici ça n'a pas d'importance)
            $coregenes2{$i}{$first_gene}= $orthogroup;
            
            
            
            
        }
        if (!$coregene_line){
            $coregene_line = $line;
        } 
    }
    elsif ($nb_found == 1) { # si on a un gène spé
        my @list_of_genes = split (',', $gene_random); # idem, on ne veut qu'un seul gène donc on crée la liste
        my $first_gene = $list_of_genes[0]; # on ne prend que le premier
        $specificgenes{$first_gene}= $orthogroup; # et pareil on crée la table de hash
    } 

    else { # là c'est le génome accessoire, i.e tout le reste !
        my @list_of_genes = split (',', $gene_random);
        my $first_gene = $list_of_genes[0];
        $accessorygenes{$first_gene}= $orthogroup;
    } 
       
}

my %hCol_Annotated = (); # HASH -> key: colonne ; val: 1 (colonnes pour lesquelles les GFF sont présents)

# Le but ici est de ne garder que les colonnes (donc les souches) qui ont un fichier GFF associé
my @list_column = split ('\t', $coregene_line);
for (my $i=1; $i <= $#list_column; $i++){
    my @list_genes = split (', ', $list_column[$i]);
    my $premier_gene = $list_genes[0];
    my $strain = $samples[$i]; # récupérer le nom de la souche


    foreach my $gff (@list_gff){
        my $result_grep = `grep $premier_gene $gff`;

        if ($result_grep){
            $hCol_Annotated{$i}=$strain; 
              
        }
        # print "$result_grep\n";
    }
}
# exit;
# foreach my $i (sort keys (%coregenes2)){ # parcours de la table %hCount2 au niveau des catégories
#     foreach my $gene (keys %{$coregenes2{$i} }){ # parcours de la table %hCount2 au niveau des espèces 
#         print "$i\t$gene\t".$coregenes2{$i}{$gene}."\n";
#     }
# }        

# while (my ($k,$v) = each(%strain_specie)) {
#     print "i=$k strain=$v\n";
# }
# exit;
# foreach my $oups (keys (%coregenes)) {
#     print "$oups\n";
# }
    # exit;

close (M);

my %Hash_Specific = ();

open (OUT, '>', $output) or die $!;
print OUT "$annotation\n";
foreach my $species (keys (%hCombination)){ # parcours de la table de hash %hCombination (key: nom esp ; val: combi)
    my $combination = $hCombination{$species}; # on récupère dans la variable $combination la valeur de chaque clé {species} (= nom esp) de la table de hash %hCombination
    my $ortho_presents = $hCombination_prs{$combination}; # $ortho_presents prend la valeur de chaque clé {combination} (récupérée juste au-dessus) de la table de hash %hCombination
    my $ortho_absents = $hCombination_abs{$combination}; # en somme on a 3 combi possibles (_1_2_3_4_5 | _6 | _7_8_9) donc pour ces 3 combi-là, qui sont les clés de %hCombination_prs ou_abs, on va retrouver la liste des orthogroupes qui correspondent 

    # open (OUT,">results.list.txt");

    if ($ortho_presents){
    	print OUT "> $species - present\n";
    	print OUT "$ortho_presents\n";
        my @orthogroups_name = split ('\n', $ortho_presents);
        foreach my $ortho (@orthogroups_name){
            $Hash_Specific{$ortho} = $species;
        }
    }

    if ($ortho_absents){
        # open (OUT2,">$species.$combination.absents.list.txt");
    	print OUT "> $species - absent\n";
    	print OUT "$ortho_absents\n";
    }

# close(OUT2);
} 

close(OUT);

#//////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////

############################################### COG ###############################################

# STEP 1 : CORRESPONDANCE ENTRE LES DIFFERENTS FICHIERS DE COG ET L'ORDRE --------------------------------------------
my @files = split(',', $annotation); # liste des différents fichiers COG (qui se retrouvent dans le dossier Naegleria)
my @list = split(',', $order); # liste de l'ordre des souches 
my ($f,$l);

my %hCorrespondance = (); #HASH -> key: un fichier COG ; val: un nom de souche (ces 2 données sont entrées en input = $annotation et $order)

# ++++++++++++ parcours de 2 listes en même temps ++++++++++++ # 
foreach $f (@files){
    $hCorrespondance{$f} = $list[$l++]; # on fait correspondre pour chaque fichier de COG, un nom de souche
}

# #Affichage du hash
# foreach $f (keys %hCorrespondance){
#     print $f."=>".$hCorrespondance{$f}."\n"
# }

# STEP 2 : POUR CHAQUE FICHIER DE COG, FAIRE CORRESPONDRE L'ESPECE (ET NON LA SOUCHE) -------------------------------------
my %hCorresp_file_species = (); # HASH -> key: un fichier de COG ; val: une espèce 
my %species_names; # HASH -> key: nom d'espèce ; val: 1 

foreach my $h (keys (%hCorrespondance)){ # parcours de la table de hash {fichier COG => nom souche} 
    my $smpl = $hCorrespondance{$h}; # $smpl prend la valeur de la clé (donc d'un nom de souche)
    my $espece = $hSpecies{$smpl}; # on regarde la correspondance entre ce $smpl et les nom qu'on a dans notre table de hash %hSpecies (fichier "species.txt") pour avoir le nom de l'espèce dans $espece
    $species_names{$espece} = 1; # on garde sous le coude nos nom d'espèce dans cette nouvelle table de hash
    $hCorresp_file_species{$h} = $espece; # BUT ATTEINT : on donne pour chaque fichier de COG le nom de l'espèce qui lui correspond
}    
# while (my ($k,$v) = each(%hCorresp_file_species)) {
#             print "file=$k sp=$v\n";
# }
# exit;

# STEP 3 : COMPTAGE DES CATEGORIES DE COG ------------------------------------------------------------------------------
my %hCount2 = (); # HASH -> key1: catégorie de COG ; key2: espèce associée ; val: comptage

# comptage du core-genome / des gènes spé / du génome accessoire
my %hCore_Count = (); # HASH -> key: catégorie de COG ; val: comptage (ce hash ne sera utilisé que pour le core-genome)
my %hSpecific_Count = (); # HASH -> key: catégorie de COG ; val: comptage
my %hAccessory_Count = (); # HASH -> key: catégorie de COG ; val: comptage

# hash pour récupérer le gène
my %hCore_Cat = (); # HASH -> key: catégorie de COG ; val: gène
my %hAccessory_Cat = (); # HASH -> key: catégorie de COG ; val: gène
my %hSpecific_Cat = (); # HASH -> key: catégorie de COG ; val: gène

# hash pour récupérer le gène
my %hCore_Cat_Esp = (); # HASH -> key1: catégorie de COG ; key2: espèce ; val: gène
my %hAccessory_Cat_Esp = (); # HASH -> key1: catégorie de COG ; key2: espèce ; val: gène
my %hSpecific_Cat_Esp = (); # HASH -> key1: catégorie de COG ; key2: espèce ; val: gène

my %Cog_of_gene = (); # HASH -> key: gène ; val: cat de COG
my %Specie_of_gene = (); # HASH -> key: gène ; val: souche

foreach my $file(@files){ # parcours de la liste des fichiers
    my $esp = $hCorresp_file_species{$file}; # on récupère l'espèce pour chaque fichier de COG dans $esp
    # print $esp."\n";
    # exit;

    my %hCount = (); # HASH -> key: catégorie de COG ; val: comptage 
    

    open (A, $file); # on va parcourir maintenant chaque fichier un à un
    
    while (my $line2 = <A>){

        $line2 =~s/\n//g;  $line2 =~s/\r//g; # on procède ligne par ligne 
        my @Genes = split('\t', $line2); 
        my $gene = $Genes[0];
        my $first_cat = $Genes[2];
        $Cog_of_gene{$gene} = $first_cat;

        for (my $j=2; $j <= $#Genes; $j++) {
            my $cat = $Genes[$j]; # on récupère la ou les catégorie(s) de COG
            $hCount{$cat}++; # pour la catégorie donnée, on incrémente son nb d'occurences

            if ($coregenes{$gene}){ # si le $gene fait bien partie du core-genome (donc de notre table de hash %coregenes)
                $hCore_Count{$cat}++; # on incrémente le hash
                $hCore_Cat{$cat}=$gene; # on récupère le nom du gène
            } 
            if ($accessorygenes{$gene}){ # s'il fait partie des gènes accessoires
                $hAccessory_Count{$cat}++;
                $hAccessory_Cat{$cat}=$gene;
            } 
            if ($specificgenes{$gene}){ # s'il fait partie des gènes spécifiques
                $hSpecific_Count{$cat}++;
                $hSpecific_Cat{$cat}=$gene;
            } 
            # $hCount2{$cat}{$esp}++; # TABLE DE HASH AVEC CLES=CAT DE COG + ESPECE VAL=COMPTAGE
        }
    
    }
    close (A);

    # print "$file $esp\n=============\n";
    while (my ($k,$v) = each(%hCount)) { # parcours de la table de hash de comptage
            # print "cat=$k nb=$v\n";
            $hCount2{$k}{$esp}.= "$v,"; # pour un $k (= une catégorie de COG) on lui associe son espèce et on donne la valeur du comptage qui vient de %hCount
                                        # le but ici est en fait pour une espèce et une catégorie données on veut le nombre d'occurences par souche (pour NF par ex on aura 5 valeurs car il y a 5 souches)
    }

    # Récupérer les gènes du core-génome
    while (my ($cat_core,$gene_core) = each(%hCore_Cat)) {
        $hCore_Cat_Esp{$cat_core}{$esp}=$gene_core;
    }
    # Récupérer les gènes du génome-accessoire
    while (my ($cat_acc,$gene_acc) = each(%hAccessory_Cat)) {
        $hAccessory_Cat_Esp{$cat_acc}{$esp}=$gene_acc;
    }
    # Récupérer les gènes spécifique 
    while (my ($cat_spe,$gene_spe) = each(%hSpecific_Cat)) {
        $hSpecific_Cat_Esp{$cat_spe}{$esp}=$gene_spe;
    }
    
}
# foreach my $category (sort keys (%hSpecific_Cat_Esp)) { # parcours au niveau de la 1ere clé

#      foreach my $especeee (keys %{$hSpecific_Cat_Esp{$category} }) { # parcours au niveau de la 2e clé pour la $category donnée
          
#          print "$category\t$especeee\t$hSpecific_Cat_Esp{$category}{$especeee}\n"; # on crée une sortie qui affiche en somme notre hash %hCount2
#      }
# }
# exit; 

# STEP 4 : AFFICHAGE DANS LE FICHIER DE SORTIE ------------------------------------------------------------------------------
open (OUT4, ">$output4") or die $!;

print OUT4 "Species"."\t"."COG categories"."\t"."Core-genome"."\t"."Accessory genome"."\t"."Specific genes"."\n";

foreach my $category (sort keys (%hCount2)){ # parcours de la table %hCount2 au niveau des catégories
    foreach my $especeee (keys %{$hCount2{$category} }){ # parcours de la table %hCount2 au niveau des espèces 
        print OUT4 "$especeee\t$category\t"; # affichage des esp puis des cat
        
        # if ($hCore_Cat_Esp{$category}{$especeee}) {
        #     print OUT4 "$hCore_Cat_Esp{$category}{$especeee}\t"; 
        # }
        my $c = 0;
        if ($hCore_Count{$category}){ # si cette catégorie existe dans le core-génome
            $c = ($hCore_Count{$category}/scalar keys (%coregenes))*100; # calcul du % du comptage
        }
        print OUT4 "$c\t"; # affichage du %
        
        # if ($hAccessory_Cat_Esp{$category}{$especeee}) {
        #     print OUT4 "$hAccessory_Cat_Esp{$category}{$especeee}\t"; 
        # }
        my $acc = 0;
        if ($hAccessory_Count{$category}){ # si cette catégorie existe dans le génome accessoire
            $acc = ($hAccessory_Count{$category}/scalar keys (%accessorygenes))*100; # calcul du % du comptage
        }
        print OUT4 "$acc\t"; # affichage du %

        # if ($hSpecific_Cat_Esp{$category}{$especeee}) {
        #     print OUT4 "$hSpecific_Cat_Esp{$category}{$especeee}\t"; 
        # }
        my $s = 0;
        if ($hSpecific_Count{$category}){ # si cette catégorie existe dans les gènes spécifiques 
            $s = ($hSpecific_Count{$category}/scalar keys (%specificgenes))*100; # calcul du % du comptage
        }
        print OUT4 "$s\n"; # affichage du %
    }    
}
close (OUT4);

open (OUT3, ">$output3") or die $!;
foreach my $category (sort keys (%hCount2)) { # parcours au niveau de la 1ere clé

     foreach my $especeee (keys %{$hCount2{$category} }) { # parcours au niveau de la 2e clé pour la $category donnée
          
         print OUT3 "$category\t$especeee\t$hCount2{$category}{$especeee}\n"; # on crée une sortie qui affiche en somme notre hash %hCount2
     }
}

close (OUT3);


open (OUT2, ">$output2") or die $!;

print OUT2 "category";
foreach my $e (sort keys (%species_names)){ # on parcours le hash d'espèces...
    print OUT2 "\t".$e; #... où on récupère le nom de celles-ci
}
print OUT2 "\n";

foreach my $category (sort keys (%hCount2)) { # on parcourt de nouveau les catégories de notre hash à 2 clés
    print OUT2 $category;

    foreach my $especes (sort keys (%species_names)) { # on parcourt également le hash d'espèces

        my $nbr = 0;
        if ($hCount2{$category}{$especes}) { # si pour une catégorie et une espèce données, on a un nombre : $nbr prend la valeur de ce dernier
            $nbr = $hCount2{$category}{$especes}; 
        }    
        # $nbr =~s/\n//g;  $nbr =~s/\r//g;  

        
        my @liste = split(',', $nbr); # vu qu'il peut y avoir plusieurs nombres on les dissocie 

        my $somme=0;
        my $n=0;
        my $moyenne=0;
        #print "\nma liste de $nbr: ".join("%",@liste)."\n";
        foreach my $x (@liste) { # on parcourt nos nombres 
            $somme=$somme+$x; 
            $n=$n+1;     
        }

        if ($n>0){
            $moyenne = $somme/$n; # on fait le calcul de la moyenne
        }
        # print "$category, $especes: $hCount2{$category}{$especes}\t";
        # print "moyenne = $moyenne\n=============\n";
        
        print OUT2 "\t".$moyenne; # fichier de sortie 
    }
print OUT2 "\n";    
}

close (OUT2);

# foreach my $cat (keys (%hCore_Cat)){
#                 print OUT4 $c_gene."\t";
#             }


#//////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////////

############################################### GFF ###############################################


my @order_gff = split(',', $order_GFF); # liste de l'ordre des souches 
my ($g,$o);

my %hgff_order = (); #HASH -> key: un fichier GFF ; val: un nom de souche (ces 2 données sont entrées en input = $annotation_GFF et $order_GFF)
my %Gene_position = ();
my %Cat_genes = ();

my %hash_of_genes = ();

# ++++++++++++ parcours de 2 listes en même temps ++++++++++++ # 
foreach $g (@list_gff){
    # print "$g\n"; 
    $hgff_order{$g} = $order_gff[$o++]; # on fait correspondre pour chaque fichier GFF, un nom de souche
    open (G, $g);
    while (<G>) {
        my @table_gff = split (/\t/, $_);
        my $chr = $table_gff[0];
        my $start = $table_gff[3];
        my $end = $table_gff[4];
        my $gene_name = $table_gff[8];
        my $type = $table_gff[2];



        if ($type && $type eq "mRNA" && $gene_name =~ /ID=([^;]+);/){
            my $gene = $1;
            # print $gene."\n";
            # exit;
            $hash_of_genes{$gene}=1;

            foreach my $cog (keys (%hCore_Cat)){
                if ($hCore_Cat{$cog} eq $gene){
                  $Cat_genes{$gene}=$cog;  
                }
            }    
            
            $Gene_position{$gene}="$chr\t$start\t$end";
        }   

        # foreach my $gene (keys (%hash_of_genes)){
        #     my $orthogrp = $hGene_OG{$gene};
        #     print "$orthogrp\n";
        # }
    }
    
    close (G);
}

mkdir("Core");
foreach my $i (keys (%coregenes2)){

    if (!$hCol_Annotated{$i}) { # si le fichier GFF n'existe pas 
        next;
    }

    
    my $strain_name = $hCol_Annotated{$i}; 
    
    my $specie_name = $hSpecies{$strain_name};



    open (OUT5, "> Core/$strain_name.$specie_name.txt") or die "Cannot create file $!\n";
    print OUT5 "Orthogroup\tGene\tChromosome\tStart\tEnd\tCOG categories\n";

    my $refcoregenes2 = $coregenes2{$i};
    my %subhash = %$refcoregenes2;
    foreach my $gene (keys (%subhash)){
    # print "$gene\n";
        my $cat = "unknown";
        if ($Cog_of_gene{$gene}){
            $cat = $Cog_of_gene{$gene};
        }     
        # if (!$Gene_position{$gene}){
        #     print "$gene\n coucou"; exit;
        # }
        
        # if (!$subhash{$gene}){
        #     print "$gene\n";
        # }
        print OUT5 $subhash{$gene}."\t"."$gene\t".$Gene_position{$gene}."\t".$cat."\n";
       
    }

    close (OUT5);
}


mkdir("GroupSpecific");
foreach my $i (keys (%Genes_of_OG)){
    if (!$hCol_Annotated{$i}) { # si le fichier GFF n'existe pas 
        next;
    }

    my $strain_name = $hCol_Annotated{$i}; 
    
    my $specie_name = $hSpecies{$strain_name};

    open (OUT6, "> GroupSpecific/$strain_name.$specie_name.txt") or die "Cannot create file $!\n";
    print OUT6 "Orthogroup\tGene\tChromosome\tStart\tEnd\tCOG categories\n";

    my $refGenes_of_OG = $Genes_of_OG{$i};
    my %subhash = %$refGenes_of_OG;
    
    foreach my $orthogroup (keys (%subhash)){
        if ($Hash_Specific{$orthogroup} && $Hash_Specific{$orthogroup} eq $specie_name){
            my $gene = $subhash{$orthogroup};

            my $cat = "unknown";
            if ($Cog_of_gene{$gene}){
                $cat = $Cog_of_gene{$gene};
            }
            print OUT6 $orthogroup."\t".$subhash{$orthogroup}."\t".$Gene_position{$gene}."\t".$cat."\n";
        }
        
    }
    close (OUT6);
}